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每日焦点!高通量测序原理及步骤(高通量测序原理)
2023-06-22 13:55:41    来源:互联网

1、测序方案建立在双脱氧测序法(Sanger等,1977)的基础上。


(资料图片)

2、为了从每一克隆插入片段两端成对地进行测序,每一个质粒模板DNA板应配备两个384孔循环测序反应板。

3、测序反应采用Big Dye Terminator chemistry version 3.1(AppliedBiosystems)和标准M13或常用正向引物和反向引物。

4、测序反应通过BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。

5、机械臂负责等分模板试样,起与反应液混合的作用,反应液含有双脱氧核苷酸、荧光标记的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和缓冲液。

6、模板和反应板有条形码,且在BiomekFX移液操作工作站上有条形码读取器跟踪,确保模板和反应液转移中没有错误。

7、30~40线性扩增步骤连续循环在MJResearchTetrads或9700热循环仪(Ap—pliedBiosystems)中进行。

8、扩展资料:技术发展:高通量测序平台(high-throughput_genome_sequence_database) 自从2005年454 Life Sciences公司(2007年该公司被Roche正式收购)推出了454 FLX焦磷酸测序平台(454 FLX pyrosequencing platform)以来。

9、曾推出过3730xlDNA测序仪(3730xl DNA Analyzer)的Applied BioSystem(ABI)这家一直占据着测序市场最大份额的公司的领先地位就开始动摇了。

10、因为他们的拳头产品毛细管阵列电泳测序仪系列(series capillary array electrophoresis sequencing machines)遇到了两个强有力的竞争对手,一个就是罗氏公司(Roche)的454 测序仪(Roch GS FLX sequencer)。

11、另一个就是2006年美国Illumina公司推出的Solexa基因组分析平台(Genome Analyzer platform),为此,2007年ABI公司推出了自主研发的SOLiD 测序仪(ABI SOLiD sequencer)。

12、这三个测序平台即为目前高通量测序平台的代表。

13、参考资料来源:百度百科-基因组高通量测序。

本文分享完毕,希望对大家有所帮助。

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